XP CEN ISO/TS 15216-2
Microbiologie des aliments - Méthode horizontale pour la recherche des virus de l'hépatite A et norovirus dans les aliments par la technique RT-PCR en temps réel - Partie 2 : méthode de détection qualitative
L'ISO/TS 15216-2:2013 décrit une méthode de détection qualitative des VHA et NoV des génogroupes I (GI) et II (GII) présents dans des échantillons pour essai d'aliments ou sur des surfaces alimentaires. Après libération des virus contenus dans l'échantillon pour essai, l'ARN viral est extrait par lyse à l'aide de thiocyanate de guanidine et par adsorption sur silice. Les séquences cibles de l'ARN viral sont amplifiées et détectées par la technique RT-PCR en temps réel. Cette approche est aussi applicable pour la détection desdits virus sur des matières contaminées, ou d'autres virus humains dans les aliments, sur les surfaces alimentaires ou sur les matières contaminées en suivant une validation appropriée et en utilisant des jeux d'amorces et de sondes propres à la cible.
L'ISO/TS 15216-2:2013 décrit une méthode de détection qualitative des VHA et NoV des génogroupes I (GI) et II (GII) présents dans des échantillons pour essai d'aliments ou sur des surfaces alimentaires. Après libération des virus contenus dans l'échantillon pour essai, l'ARN viral est extrait par lyse à l'aide de thiocyanate de guanidine et par adsorption sur silice. Les séquences cibles de l'ARN viral sont amplifiées et détectées par la technique RT-PCR en temps réel.
Cette approche est aussi applicable pour la détection desdits virus sur des matières contaminées, ou d'autres virus humains dans les aliments, sur les surfaces alimentaires ou sur les matières contaminées en suivant une validation appropriée et en utilisant des jeux d'amorces et de sondes propres à la cible.
<p>Le présent document spécifie une méthode de détection du virus de l'hépatite A (VHA) et des norovirus des génogroupes I (GI) et II (GII) dans des échantillons pour essai d'aliments (baies, légumes feuilles, tiges et bulbes, eau embouteillée, mollusques bivalves) ou sur des surfaces par RT-PCR en temps réel.</p> <p>Cette méthode n'est pas validée pour la détection des virus cibles dans d'autres aliments (y compris les aliments à plusieurs composants) ou d'autres matrices, ni pour la détection d'autres virus dans les aliments, sur les surfaces ou dans d'autres matrices.</p>
- Avant-proposiv
- Introductionvii
-
1Domaine d'application 1
-
2Références normatives 1
-
3Termes et définitions 1
-
4Principe 3
-
4.1Extraction de virus 3
-
4.2Extraction d'ARN 3
-
4.3Transcription inverse suivie d'une réaction de polymérisation en chaîne en temps réel (RT-PCR en temps réel) 4
-
4.4Témoins 4
-
4.5Résultats des essais 4
-
5Réactifs 5
-
5.1Généralités 5
-
5.2Réactifs utilisés dans l'état 5
-
5.3Réactifs préparés 6
-
6Appareillage et matériaux 7
-
7Échantillonnage 8
-
8Mode opératoire 8
-
8.1Exigences de laboratoire générales 8
-
8.2Extraction de virus 8
-
8.3Extraction d'ARN 11
-
8.4RT-PCR en temps réel 11
-
9Interprétation des résultats 13
-
9.1Généralités 13
-
9.2Élaboration des courbes étalon d'ARN viral témoin de processus 13
-
9.3Calcul de l'efficacité de l'amplification 13
-
9.4Calcul du rendement d'extraction 14
-
9.5Limite de détection théorique 14
-
10Expression des résultats 14
-
11Rapport d'essai 15
- Annexe A (normative) Diagramme de mode opératoire16
- Annexe B (informative) Mélanges maîtres (MasterMix) de la technique RT-PCR en temps réel et paramètres de cycles17
- Annexe C (informative) Amorces et sondes d'hydrolyse de la technique RT-PCR en temps réel pour la détection du VHA, du norovirus GI et du virus Mengo(témoin de processus)18
- Annexe D (informative) Croissance de la souche du virus Mengo MC0 utilisé comme témoin de processus20
- Annexe E (informative) Extraction d'ARN par l'utilisation du système NucliSens. de chez BioMerieux21
- Annexe F (normative) Composition et préparation des réactifs et des tampons23
- Annexe G (informative) Préparations mères d'ARN témoin externe (ARN TE)25
- Annexe H (informative) Disposition de plaque optique type27
- Bibliographie28
Le service Exigences vous aide à repérer rapidement au sein du texte normatif :
- les clauses impératives à satisfaire,
- les clauses non indispensables mais utiles à connaitre, telles que les permissions et les recommandations.
L’identification de ces types de clauses repose sur le document « Directives ISO/IEC, Partie 2 - Principes et règles de structure et de rédaction des documents ISO » ainsi que sur une liste de formes verbales constamment enrichie.
Avec Exigences, accédez rapidement à l’essentiel du texte normatif !
COBAZ est la solution simple et efficace pour répondre aux besoins normatifs liés à votre activité, en France comme à l’étranger.
Disponible sur abonnement, CObaz est LA solution modulaire à composer selon vos besoins d’aujourd’hui et de demain. Découvrez vite CObaz !
Demandez votre démo live gratuite, sans engagement
Je découvre COBAZ