XP CEN ISO/TS 15216-1

juin 2013

Norme Annulée

Microbiologie des aliments - Méthode horizontale pour la recherche des virus de l'hépatite A et norovirus dans les aliments par la technique RT-PCR en temps réel - Partie 1 : méthode de quantification

L'ISO/TS 15216-1:2013 décrit une méthode de quantification des niveaux de VHA et NoV des génogroupes I (GI) et II (GII) présents dans des échantillons pour essai d'aliments ou sur des surfaces alimentaires. Après libération des virus contenus dans l'échantillon pour essai, l'ARN viral est extrait par lyse à l'aide de thiocyanate de guanidine et par adsorption sur silice. Les séquences cibles de l'ARN viral sont amplifiées et détectées par la technique RT-PCR en temps réel. Cette approche est aussi applicable pour la détection desdits virus sur des matières contaminées, ou d'autres virus humains dans les aliments, sur les surfaces alimentaires ou sur les matières contaminées en suivant une validation appropriée et en utilisant des jeux d'amorces et de sondes propres à la cible.

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Informations générales

Collections

Normes nationales et documents normatifs nationaux

Date de publication

juin 2013

Nombre de pages

43 p.

Référence

XP CEN ISO/TS 15216-1

Codes ICS

07.100.30 Microbiologie alimentaire

Indice de classement

V08-670-1

Numéro de tirage

1 - 10/07/2013

Parenté internationale

ISO/TS 15216-1:2013

Parenté européenne

CEN ISO/TS 15216-1:2013

Résumé

Microbiologie des aliments - Méthode horizontale pour la recherche des virus de l'hépatite A et norovirus dans les aliments par la technique RT-PCR en temps réel - Partie 1 : méthode de quantification

Cette approche est aussi applicable pour la détection desdits virus sur des matières contaminées, ou d'autres virus humains dans les aliments, sur les surfaces alimentaires ou sur les matières contaminées en suivant une validation appropriée et en utilisant des jeux d'amorces et de sondes propres à la cible.

Norme remplacée par (1)

NF EN ISO 15216-1

mai 2017

Norme En vigueur

Microbiologie dans la chaîne alimentaire - Méthode horizontale pour la recherche des virus de l'hépatite A et norovirus dans les aliments par la technique RT-PCR en temps réel - Partie 1 : méthode de quantification

<p>ISO 15216-1:2017 décrit une méthode de quantification des niveaux d'ARN de VHA et norovirus des génogroupes I (GI) et II (GII) présents dans des échantillons pour essai d'aliments (fruits tendres, légumes feuilles, tiges et bulbes, eau embouteillée, MBV) ou sur des surfaces alimentaires. Après libération des virus contenus dans l'échantillon pour essai, l'ARN viral est extrait par lyse à l'aide de thiocyanate de guanidine et par adsorption sur silice. Les séquences cibles de l'ARN viral sont amplifiées et détectées par la technique RT-PCR en temps réel.</p> <p>Cette méthode n'est pas validée pour la détection des virus ciblés dans d'autres aliments (y compris les aliments à plusieurs composants) ou d'autres matrices, ni pour la détection d'autres virus dans les aliments, sur les surfaces alimentaires ou dans d'autres matrices.</p>

Sommaire

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Avant-propos
v
Introduction
viii
1 Domaine d'application
1
2 Références normatives
1
3 Termes et définitions
1
4 Principe
3
4.1 Extraction de virus
3
4.2 Extraction d'ARN
4
4.3 Transcription inverse suivie d'une réaction de polymérisation en chaîne en temps réel (RT-PCR en temps réel)
4
4.4 Témoins
4
4.5 Résultats des essais
5
5 Réactifs
5
5.1 Généralités
5
5.2 Réactifs utilisés dans l'état
5
5.3 Réactifs préparés
6
6 Appareillage et matériaux
7
7 Échantillonnage
9
8 Mode opératoire
9
8.1 Exigences générales de laboratoire
9
8.2 Extraction de virus
9
8.3 Extraction d'ARN
11
8.4 RT PCR en temps réel
12
9 Interprétation des résultats
14
9.1 Généralités
14
9.2 Élaboration des courbes étalon
14
9.3 Calcul de l'efficacité de l'amplification
14
9.4 Calcul du rendement d'extraction
15
9.5 Quantification d'échantillon
15
9.6 Limite de détection théorique
15
10 Expression des résultats
16
11 Rapport d'essai
16
Annexe A (normative) Diagramme de mode opératoire
17
Annexe B (informative) Mélanges maîtres (MasterMix) de la technique RT PCR en temps réel et paramètres de cycles
18
Annexe C (informative) Amorces et sondes d'hydrolyse de la technique RTPCR en temps réel pour la détection du VHA, du norovirus GI et GII et du virus Mengo(témoin de processus)
19
Annexe D (informative) Croissance de la souche du virus Mengo MCo utilisé comme témoin de processus
21
Annexe E (informative) Extraction d'ADN par l'utilisation du système NucliSens de chez BioMerieux
22
Annexe F (normative) Composition et préparation des réactifs et des tampons
24
Annexe G (informative) Préparations mères des témoins d'ADN double brin (ADNdb)
26
Annexe H (informative) Préparations mères d'ADN témoin externe
28
Annexe I (informative) Disposition de plaque optique type
30
Bibliographie
31

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