XP CEN ISO/TS 15216-1
Microbiologie des aliments - Méthode horizontale pour la recherche des virus de l'hépatite A et norovirus dans les aliments par la technique RT-PCR en temps réel - Partie 1 : méthode de quantification
L'ISO/TS 15216-1:2013 décrit une méthode de quantification des niveaux de VHA et NoV des génogroupes I (GI) et II (GII) présents dans des échantillons pour essai d'aliments ou sur des surfaces alimentaires. Après libération des virus contenus dans l'échantillon pour essai, l'ARN viral est extrait par lyse à l'aide de thiocyanate de guanidine et par adsorption sur silice. Les séquences cibles de l'ARN viral sont amplifiées et détectées par la technique RT-PCR en temps réel. Cette approche est aussi applicable pour la détection desdits virus sur des matières contaminées, ou d'autres virus humains dans les aliments, sur les surfaces alimentaires ou sur les matières contaminées en suivant une validation appropriée et en utilisant des jeux d'amorces et de sondes propres à la cible.
L'ISO/TS 15216-1:2013 décrit une méthode de quantification des niveaux de VHA et NoV des génogroupes I (GI) et II (GII) présents dans des échantillons pour essai d'aliments ou sur des surfaces alimentaires. Après libération des virus contenus dans l'échantillon pour essai, l'ARN viral est extrait par lyse à l'aide de thiocyanate de guanidine et par adsorption sur silice. Les séquences cibles de l'ARN viral sont amplifiées et détectées par la technique RT-PCR en temps réel.
Cette approche est aussi applicable pour la détection desdits virus sur des matières contaminées, ou d'autres virus humains dans les aliments, sur les surfaces alimentaires ou sur les matières contaminées en suivant une validation appropriée et en utilisant des jeux d'amorces et de sondes propres à la cible.
<p>ISO 15216-1:2017 décrit une méthode de quantification des niveaux d'ARN de VHA et norovirus des génogroupes I (GI) et II (GII) présents dans des échantillons pour essai d'aliments (fruits tendres, légumes feuilles, tiges et bulbes, eau embouteillée, MBV) ou sur des surfaces alimentaires. Après libération des virus contenus dans l'échantillon pour essai, l'ARN viral est extrait par lyse à l'aide de thiocyanate de guanidine et par adsorption sur silice. Les séquences cibles de l'ARN viral sont amplifiées et détectées par la technique RT-PCR en temps réel.</p> <p>Cette méthode n'est pas validée pour la détection des virus ciblés dans d'autres aliments (y compris les aliments à plusieurs composants) ou d'autres matrices, ni pour la détection d'autres virus dans les aliments, sur les surfaces alimentaires ou dans d'autres matrices.</p>
- Avant-proposv
- Introductionviii
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1 Domaine d'application1
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2 Références normatives1
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3 Termes et définitions1
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4 Principe3
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4.1 Extraction de virus3
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4.2 Extraction d'ARN4
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4.3 Transcription inverse suivie d'une réaction de polymérisation en chaîne en temps réel (RT-PCR en temps réel)4
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4.4 Témoins4
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4.5 Résultats des essais5
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5 Réactifs5
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5.1 Généralités5
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5.2 Réactifs utilisés dans l'état5
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5.3 Réactifs préparés6
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6 Appareillage et matériaux7
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7 Échantillonnage9
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8 Mode opératoire9
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8.1 Exigences générales de laboratoire9
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8.2 Extraction de virus9
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8.3 Extraction d'ARN11
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8.4 RT PCR en temps réel12
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9 Interprétation des résultats14
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9.1 Généralités14
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9.2 Élaboration des courbes étalon14
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9.3 Calcul de l'efficacité de l'amplification14
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9.4 Calcul du rendement d'extraction15
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9.5 Quantification d'échantillon15
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9.6 Limite de détection théorique15
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10 Expression des résultats16
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11 Rapport d'essai16
- Annexe A (normative) Diagramme de mode opératoire17
- Annexe B (informative) Mélanges maîtres (MasterMix) de la technique RT PCR en temps réel et paramètres de cycles18
- Annexe C (informative) Amorces et sondes d'hydrolyse de la technique RTPCR en temps réel pour la détection du VHA, du norovirus GI et GII et du virus Mengo(témoin de processus)19
- Annexe D (informative) Croissance de la souche du virus Mengo MCo utilisé comme témoin de processus21
- Annexe E (informative) Extraction d'ADN par l'utilisation du système NucliSens de chez BioMerieux22
- Annexe F (normative) Composition et préparation des réactifs et des tampons24
- Annexe G (informative) Préparations mères des témoins d'ADN double brin (ADNdb)26
- Annexe H (informative) Préparations mères d'ADN témoin externe28
- Annexe I (informative) Disposition de plaque optique type30
- Bibliographie31
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