XP CEN ISO/TS 15216-2

juin 2013

Norme Annulée

Microbiologie des aliments - Méthode horizontale pour la recherche des virus de l'hépatite A et norovirus dans les aliments par la technique RT-PCR en temps réel - Partie 2 : méthode de détection qualitative

L'ISO/TS 15216-2:2013 décrit une méthode de détection qualitative des VHA et NoV des génogroupes I (GI) et II (GII) présents dans des échantillons pour essai d'aliments ou sur des surfaces alimentaires. Après libération des virus contenus dans l'échantillon pour essai, l'ARN viral est extrait par lyse à l'aide de thiocyanate de guanidine et par adsorption sur silice. Les séquences cibles de l'ARN viral sont amplifiées et détectées par la technique RT-PCR en temps réel. Cette approche est aussi applicable pour la détection desdits virus sur des matières contaminées, ou d'autres virus humains dans les aliments, sur les surfaces alimentaires ou sur les matières contaminées en suivant une validation appropriée et en utilisant des jeux d'amorces et de sondes propres à la cible.

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Informations générales

Collections

Normes nationales et documents normatifs nationaux

Date de publication

juin 2013

Nombre de pages

40 p.

Référence

XP CEN ISO/TS 15216-2

Codes ICS

07.100.30 Microbiologie alimentaire

Indice de classement

V08-670-2

Numéro de tirage

1 - 10/07/2013

Parenté internationale

ISO/TS 15216-2:2013

Parenté européenne

CEN ISO/TS 15216-2:2013

Résumé

Microbiologie des aliments - Méthode horizontale pour la recherche des virus de l'hépatite A et norovirus dans les aliments par la technique RT-PCR en temps réel - Partie 2 : méthode de détection qualitative

Cette approche est aussi applicable pour la détection desdits virus sur des matières contaminées, ou d'autres virus humains dans les aliments, sur les surfaces alimentaires ou sur les matières contaminées en suivant une validation appropriée et en utilisant des jeux d'amorces et de sondes propres à la cible.

Norme remplacée par (1)

NF EN ISO 15216-2

septembre 2019

Norme En vigueur

Microbiologie dans la chaine alimentaire - Méthode horizontale pour la recherche des virus de l'hépatite A et norovirus par la technique RT-PCR en temps réel - Partie 2 : méthode de détection

<p>Le présent document spécifie une méthode de détection du virus de l'hépatite A (VHA) et des norovirus des génogroupes I (GI) et II (GII) dans des échantillons pour essai d'aliments (baies, légumes feuilles, tiges et bulbes, eau embouteillée, mollusques bivalves) ou sur des surfaces par RT-PCR en temps réel.</p> <p>Cette méthode n'est pas validée pour la détection des virus cibles dans d'autres aliments (y compris les aliments à plusieurs composants) ou d'autres matrices, ni pour la détection d'autres virus dans les aliments, sur les surfaces ou dans d'autres matrices.</p>

Sommaire

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Avant-propos
iv
Introduction
vii
1
Domaine d'application 1
2
Références normatives 1
3
Termes et définitions 1
4
Principe 3
4.1
Extraction de virus 3
4.2
Extraction d'ARN 3
4.3
Transcription inverse suivie d'une réaction de polymérisation en chaîne en temps réel (RT-PCR en temps réel) 4
4.4
Témoins 4
4.5
Résultats des essais 4
5
Réactifs 5
5.1
Généralités 5
5.2
Réactifs utilisés dans l'état 5
5.3
Réactifs préparés 6
6
Appareillage et matériaux 7
7
Échantillonnage 8
8
Mode opératoire 8
8.1
Exigences de laboratoire générales 8
8.2
Extraction de virus 8
8.3
Extraction d'ARN 11
8.4
RT-PCR en temps réel 11
9
Interprétation des résultats 13
9.1
Généralités 13
9.2
Élaboration des courbes étalon d'ARN viral témoin de processus 13
9.3
Calcul de l'efficacité de l'amplification 13
9.4
Calcul du rendement d'extraction 14
9.5
Limite de détection théorique 14
10
Expression des résultats 14
11
Rapport d'essai 15
Annexe A (normative) Diagramme de mode opératoire
16
Annexe B (informative) Mélanges maîtres (MasterMix) de la technique RT-PCR en temps réel et paramètres de cycles
17
Annexe C (informative) Amorces et sondes d'hydrolyse de la technique RT-PCR en temps réel pour la détection du VHA, du norovirus GI et du virus Mengo(témoin de processus)
18
Annexe D (informative) Croissance de la souche du virus Mengo MC0 utilisé comme témoin de processus
20
Annexe E (informative) Extraction d'ARN par l'utilisation du système NucliSens. de chez BioMerieux
21
Annexe F (normative) Composition et préparation des réactifs et des tampons
23
Annexe G (informative) Préparations mères d'ARN témoin externe (ARN TE)
25
Annexe H (informative) Disposition de plaque optique type
27
Bibliographie
28

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