Water quality - Detection and quantification of Legionella and/or Legionella pneumophila by concentration and genic amplification by polymerase chain reaction (PCR)

Le présent document s'adresse aux laboratoires ayant à détecter et quantifier des Legionella spp et/ou Legionella pneumophila par concentration et amplification génique par réaction de polymérisation en chaîne (PCR). Il décrit des exigences méthodologiques générales et des exigences d'évaluation des performances et de contrôle qualité.

Main informations

Collections

National standards and national normative documents

Publication date

April 2006

Number of pages

34 p.

Reference

XP T90-471

ICS Codes

07.100.20 Microbiology of water

Classification index

T90-471

Print number

1 - 25/08/2006

Sumary

Water quality - Detection and quantification of Legionella and/or Legionella pneumophila by concentration and genic amplification by polymerase chain reaction (PCR)

Le présent document s'adresse aux laboratoires ayant à détecter et quantifier des Legionella spp et/ou Legionella pneumophila par concentration et amplification génique par réaction de polymérisation en chaîne (PCR). Il décrit des exigences méthodologiques générales et des exigences d'évaluation des performances et de contrôle qualité.

Standard replaced by (1)

NF T90-471

April 2010

Standard Cancelled

Water quality - Detection and quantification of Legionella and/or Legionella pneumophila by concentration and genic amplification by real time polymerase chain reaction (RT - PCR)

Le présent document s'adresse aux laboratoires ayant à détecter et quantifier des Legionella spp et/ou Legionella pneumophila par concentration et amplification génique par réaction de polymérisation en chaîne en temps réel (RT - PCR). Il décrit des exigences méthodologiques générales et des exigences d'évaluation des performances et de contrôle qualité.

Table of contents

Introduction
6
1 Domaine d'application
6
2 Termes et définitions
6
3 Principe
7
4 Échantillonnage
7
5 Conditions générales de réalisation des essais
7
5.1 Généralités
7
5.2 Personnels
8
5.3 Locaux
8
5.4 Appareillage et consommables hors réactifs
8
5.5 Réactifs
9
5.6 Décontamination des matériels et locaux
10
5.7 Traitement et élimination des déchets
10
6 Mode opératoire
10
6.1 Concentration
10
6.2 Lyse, extraction, purification de l'ADN
10
6.3 Amplification de l'ADN par PCR
11
6.4 Détection quantitative
11
7 Expression des résultats
12
8 Rapport d'essai
13
9 Évaluation des performances
14
9.1 Caractérisation de la méthode
14
9.2 Inclusivité et exclusivité des sondes et amorces
14
9.3 Estimation de la limite de détection de la PCR (LD PCR)
14
9.4 Estimation de la limite de quantification de la PCR (LQ PCR)
15
9.5 Étude de la fonction d'étalonnage de l'étape PCR quantitative, mise en oeuvre et analyse statistique
17
9.6 Rendement optimal de la méthode
22
10 Contrôles qualité
23
10.1 Généralités
23
10.2 Contrôles positif et négatif de la méthode
23
10.3 Gamme d'étalonnage de la PCR
23
10.4 Blanc réactif PCR
23
10.5 Contrôle externe quantitatif de la PCR
24
10.6 Témoin interne d'inhibition
24
Annexe A (informative) Exemple de protocole de réalisation d'une gamme d'ADN étalon
26
Annexe B (informative) Exemple de méthode de détermination des CT
27
Annexe C Exemple d'étude de la fonction d'étalonnage de l'étape PCR quantitative
28
Annexe D (normative) Table statistique - Loi de Student
32
Annexe E (normative) Table statistique - Loi de Fischer
33
Bibliographie
34

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