NF T90-471
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avril 2010
Norme Annulée

Qualité de l'eau - Détection et quantification des Legionella et/ou Legionella pneumophila par concentration et amplification génique par réaction de polymérisation en chaîne en temps réel (RT - PCR)

Le présent document s'adresse aux laboratoires ayant à détecter et quantifier des Legionella spp et/ou Legionella pneumophila par concentration et amplification génique par réaction de polymérisation en chaîne en temps réel (RT - PCR). Il décrit des exigences méthodologiques générales et des exigences d'évaluation des performances et de contrôle qualité.

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Informations générales

Collections

Normes nationales et documents normatifs nationaux

Date de parution

avril 2010

Nombre de pages

42 p.

Référence

NF T90-471

Codes ICS

07.100.20   Microbiologie de l'eau
Résumé
Qualité de l'eau - Détection et quantification des Legionella et/ou Legionella pneumophila par concentration et amplification génique par réaction de polymérisation en chaîne en temps réel (RT - PCR)

Le présent document s'adresse aux laboratoires ayant à détecter et quantifier des Legionella spp et/ou Legionella pneumophila par concentration et amplification génique par réaction de polymérisation en chaîne en temps réel (RT - PCR). Il décrit des exigences méthodologiques générales et des exigences d'évaluation des performances et de contrôle qualité.
Sommaire
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  • Introduction
    6
  • 1 Domaine d'application
    8
  • 2 Références normatives
    8
  • 3 Termes et définitions
    8
  • 4 Principe
    9
  • 5 Échantillonnage
    9
  • 6 Conditions générales de réalisation des essais
    9
  • 6.1 Généralités
    9
  • 6.2 Personnel
    10
  • 6.3 Locaux
    10
  • 6.4 Appareillage et consommables hors réactifs
    10
  • 6.5 Réactifs
    11
  • 6.6 Décontamination des matériaux matériels et locaux
    12
  • 6.7 Traitement et élimination des déchets
    12
  • 7 Mode opératoire
    12
  • 7.1 Concentration
    12
  • 7.2 Extraction : Lyse cellulaire et purification de l'ADN
    12
  • 7.3 Amplification de l'ADN par PCR
    13
  • 7.4 Détection quantitative
    13
  • 8 Expression des résultats
    15
  • 9 Rapport d'essai
    16
  • 10 Évaluation des performances
    16
  • 10.1 Généralités
    16
  • 10.2 Inclusivité et exclusivité des sondes et amorces
    16
  • 10.3 Étude de la fonction de calibrage de l'étape PCR quantitative, mise en oeuvre et analyse statistique
    17
  • 10.4 Vérification de la limite de quantification de la PCR (LQPCR) et calcul de la LQ théorique de la méthode
    21
  • 10.5 Vérification de la limite de détection de la PCR (LDPCR)
    23
  • 10.6 Rendement de la méthode
    23
  • 10.7 Robustesse
    24
  • 10.8 Incertitude de mesure sur l'ensemble de la méthode
    25
  • 11 Contrôles qualité et suivi des performances
    26
  • 11.1 Généralités
    26
  • 11.2 Raccordement de la solution calibrante et du matériau de référence à l'étalon primaire
    26
  • 11.3 Suivi des performances
    28
  • 11.4 Contrôles positifs et négatifs de la méthode
    28
  • 11.5 Blanc réactif PCR
    28
  • 11.6 Témoin d'inhibition
    28
  • Annexe A (informative) Exemple de protocole de réalisation d'une solution calibrante de travail
    30
  • Annexe B (informative) Exemple de méthode de calcul des CT et du log d'unités génomes
    31
  • Annexe C (informative) Exemple d'étude de la fonction de calibrage de l'étape PCR quantitative
    32
  • Annexe D (normative) Table statistique - Loi de Student
    35
  • Annexe E (informative) Exemple d'évaluation du rendement
    36
  • Annexe F (informative) Exemple d'évaluation de l'incertitude globale
    37
  • Annexe G (normative) Données d'un essai interlaboratoires
    38
  • Annexe H (normative) Évaluation des performances dans le cadre d'une Vérification de méthode validée tierce partie
    41
  • Bibliographie
    42
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