XP T90-471

XP T90-471

avril 2006
Norme Annulée

Qualité de l'eau - Détection et quantification des Legionella et/ou Legionella pneumophila par concentration et amplification génique par réaction de polymérisation en chaîne (PCR)

Le présent document s'adresse aux laboratoires ayant à détecter et quantifier des Legionella spp et/ou Legionella pneumophila par concentration et amplification génique par réaction de polymérisation en chaîne (PCR).Il décrit des exigences méthodologiques générales et des exigences d'évaluation des performances et de contrôle qualité.

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Informations générales

Collections

Normes nationales et documents normatifs nationaux

Date de publication

avril 2006

Nombre de pages

34 p.

Référence

XP T90-471

Codes ICS

07.100.20   Microbiologie de l'eau

Indice de classement

T90-471

Numéro de tirage

1 - 13/04/2006
Résumé
Qualité de l'eau - Détection et quantification des Legionella et/ou Legionella pneumophila par concentration et amplification génique par réaction de polymérisation en chaîne (PCR)

Le présent document s'adresse aux laboratoires ayant à détecter et quantifier des Legionella spp et/ou Legionella pneumophila par concentration et amplification génique par réaction de polymérisation en chaîne (PCR). Il décrit des exigences méthodologiques générales et des exigences d'évaluation des performances et de contrôle qualité.
Norme remplacée par (1)
NF T90-471
avril 2010
Norme Annulée
Qualité de l'eau - Détection et quantification des Legionella et/ou Legionella pneumophila par concentration et amplification génique par réaction de polymérisation en chaîne en temps réel (RT - PCR)

Le présent document s'adresse aux laboratoires ayant à détecter et quantifier des Legionella spp et/ou Legionella pneumophila par concentration et amplification génique par réaction de polymérisation en chaîne en temps réel (RT - PCR). Il décrit des exigences méthodologiques générales et des exigences d'évaluation des performances et de contrôle qualité.

Sommaire
  • Introduction
    6
  • 1 Domaine d'application
    6
  • 2 Termes et définitions
    6
  • 3 Principe
    7
  • 4 Échantillonnage
    7
  • 5 Conditions générales de réalisation des essais
    7
  • 5.1 Généralités
    7
  • 5.2 Personnels
    8
  • 5.3 Locaux
    8
  • 5.4 Appareillage et consommables hors réactifs
    8
  • 5.5 Réactifs
    9
  • 5.6 Décontamination des matériels et locaux
    10
  • 5.7 Traitement et élimination des déchets
    10
  • 6 Mode opératoire
    10
  • 6.1 Concentration
    10
  • 6.2 Lyse, extraction, purification de l'ADN
    10
  • 6.3 Amplification de l'ADN par PCR
    11
  • 6.4 Détection quantitative
    11
  • 7 Expression des résultats
    12
  • 8 Rapport d'essai
    13
  • 9 Évaluation des performances
    14
  • 9.1 Caractérisation de la méthode
    14
  • 9.2 Inclusivité et exclusivité des sondes et amorces
    14
  • 9.3 Estimation de la limite de détection de la PCR (LD PCR)
    14
  • 9.4 Estimation de la limite de quantification de la PCR (LQ PCR)
    15
  • 9.5 Étude de la fonction d'étalonnage de l'étape PCR quantitative, mise en oeuvre et analyse statistique
    17
  • 9.6 Rendement optimal de la méthode
    22
  • 10 Contrôles qualité
    23
  • 10.1 Généralités
    23
  • 10.2 Contrôles positif et négatif de la méthode
    23
  • 10.3 Gamme d'étalonnage de la PCR
    23
  • 10.4 Blanc réactif PCR
    23
  • 10.5 Contrôle externe quantitatif de la PCR
    24
  • 10.6 Témoin interne d'inhibition
    24
  • Annexe A (informative) Exemple de protocole de réalisation d'une gamme d'ADN étalon
    26
  • Annexe B (informative) Exemple de méthode de détermination des CT
    27
  • Annexe C Exemple d'étude de la fonction d'étalonnage de l'étape PCR quantitative
    28
  • Annexe D (normative) Table statistique - Loi de Student
    32
  • Annexe E (normative) Table statistique - Loi de Fischer
    33
  • Bibliographie
    34
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