XP T90-471

avril 2006

Norme Annulée

Qualité de l'eau - Détection et quantification des Legionella et/ou Legionella pneumophila par concentration et amplification génique par réaction de polymérisation en chaîne (PCR)

Le présent document s'adresse aux laboratoires ayant à détecter et quantifier des Legionella spp et/ou Legionella pneumophila par concentration et amplification génique par réaction de polymérisation en chaîne (PCR).Il décrit des exigences méthodologiques générales et des exigences d'évaluation des performances et de contrôle qualité.

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Informations générales

Collections

Normes nationales et documents normatifs nationaux

Date de publication

avril 2006

Nombre de pages

34 p.

Référence

XP T90-471

Codes ICS

07.100.20 Microbiologie de l'eau

Indice de classement

T90-471

Numéro de tirage

1 - 13/04/2006

Résumé

Qualité de l'eau - Détection et quantification des Legionella et/ou Legionella pneumophila par concentration et amplification génique par réaction de polymérisation en chaîne (PCR)

Le présent document s'adresse aux laboratoires ayant à détecter et quantifier des Legionella spp et/ou Legionella pneumophila par concentration et amplification génique par réaction de polymérisation en chaîne (PCR). Il décrit des exigences méthodologiques générales et des exigences d'évaluation des performances et de contrôle qualité.

Norme remplacée par (1)

NF T90-471

avril 2010

Norme Annulée

Le présent document s'adresse aux laboratoires ayant à détecter et quantifier des Legionella spp et/ou Legionella pneumophila par concentration et amplification génique par réaction de polymérisation en chaîne en temps réel (RT - PCR). Il décrit des exigences méthodologiques générales et des exigences d'évaluation des performances et de contrôle qualité.

Sommaire

Introduction
6
1 Domaine d'application
6
2 Termes et définitions
6
3 Principe
7
4 Échantillonnage
7
5 Conditions générales de réalisation des essais
7
5.1 Généralités
7
5.2 Personnels
8
5.3 Locaux
8
5.4 Appareillage et consommables hors réactifs
8
5.5 Réactifs
9
5.6 Décontamination des matériels et locaux
10
5.7 Traitement et élimination des déchets
10
6 Mode opératoire
10
6.1 Concentration
10
6.2 Lyse, extraction, purification de l'ADN
10
6.3 Amplification de l'ADN par PCR
11
6.4 Détection quantitative
11
7 Expression des résultats
12
8 Rapport d'essai
13
9 Évaluation des performances
14
9.1 Caractérisation de la méthode
14
9.2 Inclusivité et exclusivité des sondes et amorces
14
9.3 Estimation de la limite de détection de la PCR (LD PCR)
14
9.4 Estimation de la limite de quantification de la PCR (LQ PCR)
15
9.5 Étude de la fonction d'étalonnage de l'étape PCR quantitative, mise en oeuvre et analyse statistique
17
9.6 Rendement optimal de la méthode
22
10 Contrôles qualité
23
10.1 Généralités
23
10.2 Contrôles positif et négatif de la méthode
23
10.3 Gamme d'étalonnage de la PCR
23
10.4 Blanc réactif PCR
23
10.5 Contrôle externe quantitatif de la PCR
24
10.6 Témoin interne d'inhibition
24
Annexe A (informative) Exemple de protocole de réalisation d'une gamme d'ADN étalon
26
Annexe B (informative) Exemple de méthode de détermination des CT
27
Annexe C Exemple d'étude de la fonction d'étalonnage de l'étape PCR quantitative
28
Annexe D (normative) Table statistique - Loi de Student
32
Annexe E (normative) Table statistique - Loi de Fischer
33
Bibliographie
34

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