XP CEN ISO/TS 13136
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décembre 2012
Norme En vigueur

Microbiologie des aliments - Méthode basée sur la réaction de polymérisation en chaîne (PCR) en temps réel pour la détection des micro-organismes pathogènes dans les aliments - Méthode horizontale pour la détection des Escherichia coli producteurs de Shigatoxines (STEC) et la détermination des sérogroupes O157, O111, O26, O103 et O145

Le présent document décrit l'identification d'Escherichia coli producteurs de Shigatoxines (STEC) par détection des gènes suivants : les principaux gènes de virulence des STEC, stx et eae ; les gènes associés aux sérogroupes O157, O111, O26, O103 et O145. L'isolement d'une souche STEC à partir d'échantillons positifs pour la présence des gènes associés aux sérogroupes couverts par le domaine d'application de la présente méthode peut être facilité par le recours à des techniques d'enrichissement adaptées au sérogroupe détecté. Le présent document s'applique aux produits destinés à être consommés par l'Homme et aux aliments pour animaux ; aux échantillons environnementaux dans la zone de production et de manipulation des aliments et aux échantillons environnementaux dans la zone de production primaire.

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Informations générales

Collections

Normes nationales et documents normatifs nationaux

Date de parution

décembre 2012

Nombre de pages

35 p.

Référence

XP CEN ISO/TS 13136

Codes ICS

07.100.30   Microbiologie alimentaire

Indice de classement

V08-790

Numéro de tirage

1 - 26/12/2012
Résumé
Microbiologie des aliments - Méthode basée sur la réaction de polymérisation en chaîne (PCR) en temps réel pour la détection des micro-organismes pathogènes dans les aliments - Méthode horizontale pour la détection des Escherichia coli producteurs de Shigatoxines (STEC) et la détermination des sérogroupes O157, O111, O26, O103 et O145

Le présent document décrit l'identification d'Escherichia coli producteurs de Shigatoxines (STEC) par détection des gènes suivants : les principaux gènes de virulence des STEC, stx et eae ; les gènes associés aux sérogroupes O157, O111, O26, O103 et O145. L'isolement d'une souche STEC à partir d'échantillons positifs pour la présence des gènes associés aux sérogroupes couverts par le domaine d'application de la présente méthode peut être facilité par le recours à des techniques d'enrichissement adaptées au sérogroupe détecté. Le présent document s'applique aux produits destinés à être consommés par l'Homme et aux aliments pour animaux ; aux échantillons environnementaux dans la zone de production et de manipulation des aliments et aux échantillons environnementaux dans la zone de production primaire.
Sommaire
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  • Avant-propos
    iv
  • Introduction
    v
  • 1 Domaine d'application
    1
  • 2 Références normatives
    2
  • 3 Termes et définitions
    2
  • 4 Principe
    2
  • 4.1 Généralités
    2
  • 4.2 Enrichissement microbien
    3
  • 4.3 Extraction des acides nucléiques
    3
  • 4.4 Gènes cibles
    3
  • 4.5 Détection
    3
  • 4.6 Isolement
    4
  • 5 Diluants, milieux de culture et réactifs
    4
  • 5.1 Milieux de culture
    4
  • 5.2 Réactifs pour l'extraction des acides nucléiques
    5
  • 5.3 Réactifs pour la PCR
    5
  • 6 Appareillage
    6
  • 7 Échantillonnage
    6
  • 8 Préparation de l'échantillon pour essai
    6
  • 9 Mode opératoire
    6
  • 9.1 Prise d'essai et suspension mère
    6
  • 9.2 Enrichissement
    7
  • 9.3 Extraction des acides nucléiques
    7
  • 9.4 Amplification par PCR (pour la PCR en temps réel)
    7
  • 9.5 Isolement de souches
    8
  • 10 Expression des résultats
    8
  • 11 Données de performances
    9
  • Annexe A (normative) Schéma du mode opératoire de criblage
    13
  • Annexe B (normative) Schéma du mode opératoire d'isolement et de confirmation
    14
  • Annexe C (informative) Identification des Escherichia coli producteurs de Shigatoxines (STEC) par amplification PCR multiplex des gènes de virulence et détection des amplicons par électrophorèse en gel d'agarose
    15
  • Annexe D (informative) Contrôle interne d'amplification
    20
  • Annexe E (informative) Amorces et sondes pour les réactions PCR
    21
  • Annexe F (normative) Isolement des souches STEC
    23
  • Bibliographie
    24
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