XP CEN ISO/TS 13136
Microbiologie des aliments - Méthode basée sur la réaction de polymérisation en chaîne (PCR) en temps réel pour la détection des micro-organismes pathogènes dans les aliments - Méthode horizontale pour la détection des Escherichia coli producteurs de Shigatoxines (STEC) et la détermination des sérogroupes O157, O111, O26, O103 et O145
L'ISO/TS 13136:2012 décrit une méthode horizontale pour la détection: a)des principaux gènes de virulence des STEC; b) des gènes associés aux sérogroupes O157, O111, O26, O103 et O145. Dans le cas de la détection de ces gènes, une procédure d'isolement de souches est mise en place afin de confirmer la présence simultanée des gènes dans une seule et même cellule bactérienne vivante. L'ISO/TS 13136:2012 repose sur l'utilisation de la PCR en temps réel comme technologie de référence pour la détection des gènes de virulence et des gènes associés aux sérogroupes. Un protocole de PCR en temps réel est par conséquent décrit en détail. L'ISO/TS 13136:2012 s'applique: 1) aux produits destinés à être consommés par l'Homme et aux aliments pour animaux; 2) aux échantillons environnementaux dans la zone de production et de manipulation des aliments; 3) aux échantillons environnementaux dans la zone de production primaire.
L'ISO/TS 13136:2012 décrit une méthode horizontale pour la détection: a)des principaux gènes de virulence des STEC; b) des gènes associés aux sérogroupes O157, O111, O26, O103 et O145.
Dans le cas de la détection de ces gènes, une procédure d'isolement de souches est mise en place afin de confirmer la présence simultanée des gènes dans une seule et même cellule bactérienne vivante.
L'ISO/TS 13136:2012 repose sur l'utilisation de la PCR en temps réel comme technologie de référence pour la détection des gènes de virulence et des gènes associés aux sérogroupes. Un protocole de PCR en temps réel est par conséquent décrit en détail.
L'ISO/TS 13136:2012 s'applique: 1) aux produits destinés à être consommés par l'Homme et aux aliments pour animaux; 2) aux échantillons environnementaux dans la zone de production et de manipulation des aliments; 3) aux échantillons environnementaux dans la zone de production primaire.
- Avant-proposiv
- Introductionv
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1 Domaine d'application1
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2 Références normatives2
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3 Termes et définitions2
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4 Principe2
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4.1 Généralités2
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4.2 Enrichissement microbien3
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4.3 Extraction des acides nucléiques3
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4.4 Gènes cibles3
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4.5 Détection3
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4.6 Isolement4
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5 Diluants, milieux de culture et réactifs4
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5.1 Milieux de culture4
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5.2 Réactifs pour l'extraction des acides nucléiques5
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5.3 Réactifs pour la PCR5
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6 Appareillage6
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7 Échantillonnage6
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8 Préparation de l'échantillon pour essai6
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9 Mode opératoire6
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9.1 Prise d'essai et suspension mère6
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9.2 Enrichissement7
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9.3 Extraction des acides nucléiques7
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9.4 Amplification par PCR (pour la PCR en temps réel)7
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9.5 Isolement de souches8
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10 Expression des résultats8
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11 Données de performances9
- Annexe A (normative) Schéma du mode opératoire de criblage13
- Annexe B (normative) Schéma du mode opératoire d'isolement et de confirmation14
- Annexe C (informative) Identification des Escherichia coli producteurs de Shigatoxines (STEC) par amplification PCR multiplex des gènes de virulence et détection des amplicons par électrophorèse en gel d'agarose15
- Annexe D (informative) Contrôle interne d'amplification20
- Annexe E (informative) Amorces et sondes pour les réactions PCR21
- Annexe F (normative) Isolement des souches STEC23
- Bibliographie24
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