XP CEN ISO/TS 15216-1
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juin 2013
Norme Annulée

Microbiologie des aliments - Méthode horizontale pour la recherche des virus de l'hépatite A et norovirus dans les aliments par la technique RT-PCR en temps réel - Partie 1 : méthode de quantification

Le présent document décrit une méthode de quantification des niveaux de VHA et NoV des génogroupes I (GI) et II (GII) présents dans des échantillons pour essai d'aliments ou sur des surfaces alimentaires. Après libération des virus contenus dans l'échantillon pour essai, l'ARN viral est extrait par lyse à l'aide de thiocyanate de guanidine et par adsorption sur silice. Les séquences cibles de l'ARN viral sont amplifiées et détectées par la technique RT-PCR en temps réel. Cette approche est aussi applicable pour la détection desdits virus sur des matières contaminées, ou d'autres virus humains dans les aliments, sur les surfaces alimentaires ou sur les matières contaminées en suivant une validation appropriée et en utilisant des jeux d'amorces et de sondes propres à la cible.

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Informations générales

Collections

Normes nationales et documents normatifs nationaux

Date de parution

juillet 2013

Nombre de pages

43 p.

Référence

XP CEN ISO/TS 15216-1

Codes ICS

07.100.30   Microbiologie alimentaire

Indice de classement

V08-670-1

Numéro de tirage

1 - 10/07/2013
Résumé
Microbiologie des aliments - Méthode horizontale pour la recherche des virus de l'hépatite A et norovirus dans les aliments par la technique RT-PCR en temps réel - Partie 1 : méthode de quantification

Le présent document décrit une méthode de quantification des niveaux de VHA et NoV des génogroupes I (GI) et II (GII) présents dans des échantillons pour essai d'aliments ou sur des surfaces alimentaires. Après libération des virus contenus dans l'échantillon pour essai, l'ARN viral est extrait par lyse à l'aide de thiocyanate de guanidine et par adsorption sur silice. Les séquences cibles de l'ARN viral sont amplifiées et détectées par la technique RT-PCR en temps réel. Cette approche est aussi applicable pour la détection desdits virus sur des matières contaminées, ou d'autres virus humains dans les aliments, sur les surfaces alimentaires ou sur les matières contaminées en suivant une validation appropriée et en utilisant des jeux d'amorces et de sondes propres à la cible.
Norme remplacée par (1)
NF EN ISO 15216-1
Norme En vigueur
Microbiologie dans la chaîne alimentaire - Méthode horizontale pour la recherche des virus de l'hépatite A et norovirus dans les aliments par la technique RT-PCR en temps réel - Partie 1 : méthode de quantification

Le présent document décrit une méthode de quantification des niveaux d'ARN de VHA et norovirus des génogroupes I (GI) et II (GII) présents dans des échantillons pour essai d'aliments (fruits tendres, légumes feuilles, tiges et bulbes, eau embouteillée, mollusques bivalves) ou sur des surfaces alimentaires. Après libération des virus contenus dans l'échantillon pour essai, l'ARN viral est extrait par lyse à l'aide de thiocyanate de guanidine et par adsorption sur silice. Les séquences cibles de l'ARN viral sont amplifiées et détectées par la technique RT-PCR en temps réel. Cette méthode n'est pas validée pour la détection des virus ciblés dans d'autres aliments (y compris les aliments à plusieurs composants) ou d'autres matrices, ni pour la détection d'autres virus dans les aliments, sur les surfaces alimentaires ou dans d'autres matrices.

Sommaire
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  • Avant-propos
    v
  • Introduction
    viii
  • 1 Domaine d'application
    1
  • 2 Références normatives
    1
  • 3 Termes et définitions
    1
  • 4 Principe
    3
  • 4.1 Extraction de virus
    3
  • 4.2 Extraction d'ARN
    4
  • 4.3 Transcription inverse suivie d'une réaction de polymérisation en chaîne en temps réel (RT-PCR en temps réel)
    4
  • 4.4 Témoins
    4
  • 4.5 Résultats des essais
    5
  • 5 Réactifs
    5
  • 5.1 Généralités
    5
  • 5.2 Réactifs utilisés dans l'état
    5
  • 5.3 Réactifs préparés
    6
  • 6 Appareillage et matériaux
    7
  • 7 Échantillonnage
    9
  • 8 Mode opératoire
    9
  • 8.1 Exigences générales de laboratoire
    9
  • 8.2 Extraction de virus
    9
  • 8.3 Extraction d'ARN
    11
  • 8.4 RT PCR en temps réel
    12
  • 9 Interprétation des résultats
    14
  • 9.1 Généralités
    14
  • 9.2 Élaboration des courbes étalon
    14
  • 9.3 Calcul de l'efficacité de l'amplification
    14
  • 9.4 Calcul du rendement d'extraction
    15
  • 9.5 Quantification d'échantillon
    15
  • 9.6 Limite de détection théorique
    15
  • 10 Expression des résultats
    16
  • 11 Rapport d'essai
    16
  • Annexe A (normative) Diagramme de mode opératoire
    17
  • Annexe B (informative) Mélanges maîtres (MasterMix) de la technique RT PCR en temps réel et paramètres de cycles
    18
  • Annexe C (informative) Amorces et sondes d'hydrolyse de la technique RTPCR en temps réel pour la détection du VHA, du norovirus GI et GII et du virus Mengo(témoin de processus)
    19
  • Annexe D (informative) Croissance de la souche du virus Mengo MCo utilisé comme témoin de processus
    21
  • Annexe E (informative) Extraction d'ADN par l'utilisation du système NucliSens de chez BioMerieux
    22
  • Annexe F (normative) Composition et préparation des réactifs et des tampons
    24
  • Annexe G (informative) Préparations mères des témoins d'ADN double brin (ADNdb)
    26
  • Annexe H (informative) Préparations mères d'ADN témoin externe
    28
  • Annexe I (informative) Disposition de plaque optique type
    30
  • Bibliographie
    31
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