Le présent document s''inscrit dans un ensemble de normes de méthodes d''analyse en santé animale. Il décrit une technique de mise en évidence d''anticorps dirigés contre le virus de la rhinopneumonie dans le sérum des équidés. La technique utilisée est la fixation du complément.
1 Domaine d'application 6 2 Références 6 2.1 Références normatives 6 2.2 Références réglementaires 6 3 Termes, définitions et abréviations 6 4 Principe et réaction 7 4.1 Principe 7 4.2 Réaction 7 4.2.1 Méthode 7 4.2.2 Antigènes 7 4.2.3 Sérums à tester 8 4.2.4 Sérums de contrôle 8 4.2.5 Complément 8 4.2.6 Système hémolytique 8 4.3 Contrôles 8 4.3.1 Témoins sérums 8 4.3.2 Témoins antigènes 8 4.3.3 Témoin complément 8 4.3.4 Témoin système hémolytique 9 4.3.5 Gamme témoin d'hémolyse 9 4.3.6 Sérums de contrôle 9 5 Diluants, milieux de culture, réactifs et autres produits 9 5.1 Diluants 9 5.1.1 Gélatine glucose barbital (GGB) 9 5.1.2 Tampon véronal calcium magnésium pH 7,2 (TV) 9 5.2 Milieux de culture 9 5.3 Réactifs 10 5.3.1 Antigènes 10 5.3.2 Complément de cobaye lyophilisé (C) 10 5.3.3 Hématies de mouton 10 5.3.4 Sérum hémolytique de lapin anti-hématies de mouton 10 5.3.5 Sérums de contrôle 10 5.4 Autres produits 10 5.4.1 Eau 10 6 Appareillage et verrerie 11 7 Échantillonnage 11 8 Préparation de l'échantillon pour analyse 11 9 Mode opératoire 11 9.1 Épreuve 11 9.1.1 Préparation des hématies 11 9.1.2 Préparation du sérum hémolytique 11 9.1.3 Préparation des antigènes rhinopneumonie et tissu normal 11 9.1.4 Préparation du complément 12 9.1.5 Décomplémentation des sérums à tester et des sérums de contrôle 12 9.1.6 Dilution des sérums à tester et des sérums de contrôle 12 9.1.7 Répartition des sérums, des antigènes, du tampon et du complément 12 9.1.8 Réalisation des témoins 12 9.1.9 Réaction 12 9.1.10 Étape de révélation 13 9.2 Validation et lecture 13 9.2.1 Centrifugation 13 9.2.2 Validation 13 9.2.3 Lecture 13 9.3 Interprétation 13 10 Conditions de conservation et d'élimination des échantillons 14 11 Restitution des résultats 14 12 Fidélité 14 13 Rapport 14 Annexe A (normative) Titrage du sérum hémolytique 15 Annexe B (normative) Constitution d'un stock de complément 16 Annexe C (normative) Préparation de la gamme d'hémolyse 17 C.1 Préparation de la gamme d'hémolyse 17 C.2 Interprétation des résultats 17 Annexe D (normative) Titrage du complément 18 D.1 Préparation du complément et de l'antigène, répartition 18 D.2 Préparation du système hémolytique, répartition 19 D.3 Lecture et calcul du titre 19 D.3.1 Lecture du titrage 19 D.3.2 Calcul de la dilution de complément à utiliser pour les épreuves 19 Annexe E (normative) Titrage de l'antigène 20 E.1 Préparation du sérum positif 20 E.2 Préparation des antigènes 20 E.3 Répartition des antigènes et du sérum 20 E.4 Préparation et répartition du complément 20 E.5 Réalisation des témoins 21 E.6 Révélation (le lendemain) (9.1.10) 21 E.7 Validation et lecture 21 E.7.1 Validation (9.2.1) 21 E.7.2 Lecture 21 E.8 Détermination de la dilution d'antigène à utiliser 21 Bibliographie 22
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