NF U47-017
Méthodes d'analyse en santé animale - Recherche d'anticorps contre la rhinopneumonie équine par la technique de fixation du complément
1 Domaine d'application 62 Références 62.1 Références normatives 62.2 Références réglementaires 63 Termes, définitions et abréviations 64 Principe et réaction 74.1 Principe 74.2 Réaction 74.2.1 Méthode 74.2.2 Antigènes 74.2.3 Sérums à tester 84.2.4 Sérums de contrôle 84.2.5 Complément 84.2.6 Système hémolytique 84.3 Contrôles 84.3.1 Témoins sérums 84.3.2 Témoins antigènes 84.3.3 Témoin complément 84.3.4 Témoin système hémolytique 94.3.5 Gamme témoin d'hémolyse 94.3.6 Sérums de contrôle 95 Diluants, milieux de culture, réactifs et autres produits 95.1 Diluants 95.1.1 Gélatine glucose barbital (GGB) 95.1.2 Tampon véronal calcium magnésium pH 7,2 (TV) 95.2 Milieux de culture 95.3 Réactifs 105.3.1 Antigènes 105.3.2 Complément de cobaye lyophilisé (C) 105.3.3 Hématies de mouton 105.3.4 Sérum hémolytique de lapin anti-hématies de mouton 105.3.5 Sérums de contrôle 105.4 Autres produits 105.4.1 Eau 106 Appareillage et verrerie 117 Échantillonnage 118 Préparation de l'échantillon pour analyse 119 Mode opératoire 119.1 Épreuve 119.1.1 Préparation des hématies 119.1.2 Préparation du sérum hémolytique 119.1.3 Préparation des antigènes rhinopneumonie et tissu normal 119.1.4 Préparation du complément 129.1.5 Décomplémentation des sérums à tester et des sérums de contrôle 129.1.6 Dilution des sérums à tester et des sérums de contrôle 129.1.7 Répartition des sérums, des antigènes, du tampon et du complément 129.1.8 Réalisation des témoins 129.1.9 Réaction 129.1.10 Étape de révélation 139.2 Validation et lecture 139.2.1 Centrifugation 139.2.2 Validation 139.2.3 Lecture 139.3 Interprétation 1310 Conditions de conservation et d'élimination des échantillons 1411 Restitution des résultats 1412 Fidélité 1413 Rapport 14Annexe A (normative) Titrage du sérum hémolytique 15Annexe B (normative) Constitution d'un stock de complément 16Annexe C (normative) Préparation de la gamme d'hémolyse 17C.1 Préparation de la gamme d'hémolyse 17C.2 Interprétation des résultats 17Annexe D (normative) Titrage du complément 18D.1 Préparation du complément et de l'antigène, répartition 18D.2 Préparation du système hémolytique, répartition 19D.3 Lecture et calcul du titre 19D.3.1 Lecture du titrage 19D.3.2 Calcul de la dilution de complément à utiliser pour les épreuves 19Annexe E (normative) Titrage de l'antigène 20E.1 Préparation du sérum positif 20E.2 Préparation des antigènes 20E.3 Répartition des antigènes et du sérum 20E.4 Préparation et répartition du complément 20E.5 Réalisation des témoins 21E.6 Révélation (le lendemain) (9.1.10) 21E.7 Validation et lecture 21E.7.1 Validation (9.2.1) 21E.7.2 Lecture 21E.8 Détermination de la dilution d'antigène à utiliser 21Bibliographie 22
1 Domaine d'application 6
2 Références 6
2.1 Références normatives 6
2.2 Références réglementaires 6
3 Termes, définitions et abréviations 6
4 Principe et réaction 7
4.1 Principe 7
4.2 Réaction 7
4.2.1 Méthode 7
4.2.2 Antigènes 7
4.2.3 Sérums à tester 8
4.2.4 Sérums de contrôle 8
4.2.5 Complément 8
4.2.6 Système hémolytique 8
4.3 Contrôles 8
4.3.1 Témoins sérums 8
4.3.2 Témoins antigènes 8
4.3.3 Témoin complément 8
4.3.4 Témoin système hémolytique 9
4.3.5 Gamme témoin d'hémolyse 9
4.3.6 Sérums de contrôle 9
5 Diluants, milieux de culture, réactifs et autres produits 9
5.1 Diluants 9
5.1.1 Gélatine glucose barbital (GGB) 9
5.1.2 Tampon véronal calcium magnésium pH 7,2 (TV) 9
5.2 Milieux de culture 9
5.3 Réactifs 10
5.3.1 Antigènes 10
5.3.2 Complément de cobaye lyophilisé (C) 10
5.3.3 Hématies de mouton 10
5.3.4 Sérum hémolytique de lapin anti-hématies de mouton 10
5.3.5 Sérums de contrôle 10
5.4 Autres produits 10
5.4.1 Eau 10
6 Appareillage et verrerie 11
7 Échantillonnage 11
8 Préparation de l'échantillon pour analyse 11
9 Mode opératoire 11
9.1 Épreuve 11
9.1.1 Préparation des hématies 11
9.1.2 Préparation du sérum hémolytique 11
9.1.3 Préparation des antigènes rhinopneumonie et tissu normal 11
9.1.4 Préparation du complément 12
9.1.5 Décomplémentation des sérums à tester et des sérums de contrôle 12
9.1.6 Dilution des sérums à tester et des sérums de contrôle 12
9.1.7 Répartition des sérums, des antigènes, du tampon et du complément 12
9.1.8 Réalisation des témoins 12
9.1.9 Réaction 12
9.1.10 Étape de révélation 13
9.2 Validation et lecture 13
9.2.1 Centrifugation 13
9.2.2 Validation 13
9.2.3 Lecture 13
9.3 Interprétation 13
10 Conditions de conservation et d'élimination des échantillons 14
11 Restitution des résultats 14
12 Fidélité 14
13 Rapport 14
Annexe A (normative) Titrage du sérum hémolytique 15
Annexe B (normative) Constitution d'un stock de complément 16
Annexe C (normative) Préparation de la gamme d'hémolyse 17
C.1 Préparation de la gamme d'hémolyse 17
C.2 Interprétation des résultats 17
Annexe D (normative) Titrage du complément 18
D.1 Préparation du complément et de l'antigène, répartition 18
D.2 Préparation du système hémolytique, répartition 19
D.3 Lecture et calcul du titre 19
D.3.1 Lecture du titrage 19
D.3.2 Calcul de la dilution de complément à utiliser pour les épreuves 19
Annexe E (normative) Titrage de l'antigène 20
E.1 Préparation du sérum positif 20
E.2 Préparation des antigènes 20
E.3 Répartition des antigènes et du sérum 20
E.4 Préparation et répartition du complément 20
E.5 Réalisation des témoins 21
E.6 Révélation (le lendemain) (9.1.10) 21
E.7 Validation et lecture 21
E.7.1 Validation (9.2.1) 21
E.7.2 Lecture 21
E.8 Détermination de la dilution d'antigène à utiliser 21
Bibliographie 22
Le présent document s'inscrit dans un ensemble de normes de méthodes d'analyse en santé animale. Il décrit une technique de mise en évidence d'anticorps dirigés contre le virus de la rhinopneumonie dans le sérum des équidés. La technique utilisée est la fixation du complément.
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