NF V03-045
Selection principles and validation criteria for varietal identification methods using specific nucleic acid analyses
Le présent document décrit des outils moléculaires, permettant d'établir des profils moléculaires de variétés d'espèces végétales dans un but d'identification variétale, c'est-à-dire la confirmation d'identité par rapport à une ou des référence(s). Ce document ne traite pas de la pureté génétique.
Le présent document décrit des outils moléculaires, permettant d'établir des profils moléculaires de variétés d'espèces végétales dans un but d'identification variétale, c'est-à-dire la confirmation d'identité par rapport à une ou des référence(s). Ce document ne traite pas de la pureté génétique.
<p>ISO 13495:2013 specifies molecular tools for generating molecular profiles of varieties of plant species, enabling varietal identification, i.e. confirmation of identity in relation to one or more references.</p> <p>ISO 13495:2013 is applicable to various matrices, seeds, leaves, roots, industrial products composed of only one variety. Matrices presented in the form of mixtures of varieties (such as purees, compotes, flours) are excluded from the scope of ISO 13495:2013. It does not deal with genetic purity.</p>
- Introduction5
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1 Domaine d'application5
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2 Références normatives5
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3 Termes et définitions5
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3.1 Termes généraux5
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3.2 Termes relatifs à l'extraction et à la purification de l'ADN/ARN6
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3.3 Termes relatifs à l'amplification d'acides nucléiques par PCR6
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3.4 Termes relatifs à la détection/révélation7
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3.5 Termes relatifs aux témoins8
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3.6 Termes relatifs aux marqueurs8
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4 Assurer la qualité des résultats d'essai9
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5 Choix des méthodes11
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6 Choix des marqueurs11
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6.1 Critères généraux11
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6.2 Choix du jeu de marqueur11
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6.3 Marqueurs SSR11
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6.4 Polymorphisme nucléotidique (SNP)12
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7 Matériel à analyser12
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7.1 Échantillon12
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7.2 Taille de l'échantillon12
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7.3 Matériel de référence12
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8 Validation13
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8.1 Critères de validation intra laboratoire13
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8.2 Critères de validation interlaboratoire14
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9 Interprétation et expression des résultats15
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9.1 Notation des données15
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9.2 Analyse des résultats15
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9.3 Expression de résultats16
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10 Rapport d'essai16
- Annexe A (informative) Méthode d'analyse SSR sur le maïs17
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A.1 Principe17
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A.2 Domaine d'application17
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A.3 Consommables et équipements17
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A.4 Mode opératoire18
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A.5 Liste des marqueurs SSR du maïs validés par une étude intralaboratoire au GEVES19
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A.6 Profils moléculaires observés sur 10 lignées de maïs (tailles alléliques en pb) lors de la validation intralaboratoire au GEVES21
- Annexe B (informative) Méthode d'analyse SSR sur le tournesol22
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B.1 Principe22
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B.2 Domaine d'application22
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B.3 Consommables et équipements22
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B.4 Mode opératoire23
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B.5 Extraction d'ADN23
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B.6 Liste de marqueurs SSR établi pour le test de conformité des hybrides du tournesol24
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B.7 Profils moléculaires observés sur 10 lignées de tournesol (tailles alléliques en pb) lors de la validation intralaboratoire au GEVES26
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