Water quality - Detection and quantification of Legionella and/or Legionella pneumophila by concentration and genic amplification by real time polymerase chain reaction (RT - PCR)

Le présent document s'adresse aux laboratoires ayant à détecter et quantifier des Legionella spp et/ou Legionella pneumophila par concentration et amplification génique par réaction de polymérisation en chaîne en temps réel (RT - PCR). Il décrit des exigences méthodologiques générales et des exigences d'évaluation des performances et de contrôle qualité.

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Main informations

Collections

National standards and national normative documents

Publication date

April 2010

Number of pages

42 p.

Reference

NF T90-471

ICS Codes

07.100.20 Microbiology of water

Classification index

T90-471

Print number

1 - 16/04/2010

Sumary

Water quality - Detection and quantification of Legionella and/or Legionella pneumophila by concentration and genic amplification by real time polymerase chain reaction (RT - PCR)

Le présent document s'adresse aux laboratoires ayant à détecter et quantifier des Legionella spp et/ou Legionella pneumophila par concentration et amplification génique par réaction de polymérisation en chaîne en temps réel (RT - PCR). Il décrit des exigences méthodologiques générales et des exigences d'évaluation des performances et de contrôle qualité.

Replaced standards (1)

XP T90-471

April 2006

Standard Cancelled

Water quality - Detection and quantification of Legionella and/or Legionella pneumophila by concentration and genic amplification by polymerase chain reaction (PCR)

Le présent document s'adresse aux laboratoires ayant à détecter et quantifier des Legionella spp et/ou Legionella pneumophila par concentration et amplification génique par réaction de polymérisation en chaîne (PCR). Il décrit des exigences méthodologiques générales et des exigences d'évaluation des performances et de contrôle qualité.

Standard replaced by (1)

NF T90-471

June 2015

Standard Current

Water quality - Detection and quantification of Legionella and/or Legionella pneumophila by concentration and genic amplification by real time polymerase chain reaction (qPCR)

Le présent document s'adresse aux laboratoires ayant à détecter et quantifier des Legionella spp et/ou Legionella pneumophila par concentration et amplification génique par réaction de polymérisation en chaîne en temps réel (qPCR). Il décrit des exigences méthodologiques générales et des exigences d'évaluation des performances et de contrôle qualité.

Table of contents

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Introduction
6
1 Domaine d'application
8
2 Références normatives
8
3 Termes et définitions
8
4 Principe
9
5 Échantillonnage
9
6 Conditions générales de réalisation des essais
9
6.1 Généralités
9
6.2 Personnel
10
6.3 Locaux
10
6.4 Appareillage et consommables hors réactifs
10
6.5 Réactifs
11
6.6 Décontamination des matériaux matériels et locaux
12
6.7 Traitement et élimination des déchets
12
7 Mode opératoire
12
7.1 Concentration
12
7.2 Extraction : Lyse cellulaire et purification de l'ADN
12
7.3 Amplification de l'ADN par PCR
13
7.4 Détection quantitative
13
8 Expression des résultats
15
9 Rapport d'essai
16
10 Évaluation des performances
16
10.1 Généralités
16
10.2 Inclusivité et exclusivité des sondes et amorces
16
10.3 Étude de la fonction de calibrage de l'étape PCR quantitative, mise en oeuvre et analyse statistique
17
10.4 Vérification de la limite de quantification de la PCR (LQPCR) et calcul de la LQ théorique de la méthode
21
10.5 Vérification de la limite de détection de la PCR (LDPCR)
23
10.6 Rendement de la méthode
23
10.7 Robustesse
24
10.8 Incertitude de mesure sur l'ensemble de la méthode
25
11 Contrôles qualité et suivi des performances
26
11.1 Généralités
26
11.2 Raccordement de la solution calibrante et du matériau de référence à l'étalon primaire
26
11.3 Suivi des performances
28
11.4 Contrôles positifs et négatifs de la méthode
28
11.5 Blanc réactif PCR
28
11.6 Témoin d'inhibition
28
Annexe A (informative) Exemple de protocole de réalisation d'une solution calibrante de travail
30
Annexe B (informative) Exemple de méthode de calcul des CT et du log d'unités génomes
31
Annexe C (informative) Exemple d'étude de la fonction de calibrage de l'étape PCR quantitative
32
Annexe D (normative) Table statistique - Loi de Student
35
Annexe E (informative) Exemple d'évaluation du rendement
36
Annexe F (informative) Exemple d'évaluation de l'incertitude globale
37
Annexe G (normative) Données d'un essai interlaboratoires
38
Annexe H (normative) Évaluation des performances dans le cadre d'une Vérification de méthode validée tierce partie
41
Bibliographie
42

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